外泌体（Exosomes）提取试剂盒-体液4ml/T

产品概述

总外泌体（Exosomes）提取试剂盒（体液用）适用于从动物体液（如腹水、脑脊液、羊水等）中提取总外泌体。不需要超速离心，仅需通过简单的常规离心即可从样本中获取大量结构完整的外泌体，具有快速简单，提取效率高的特点，可节省更多的实验时间和样本。提取的外泌体可根据实验目的用于后续的多种实验，应用范围广泛。 本试剂盒不适合唾液和乳汁的外泌体提取，需要用于唾液、乳汁外泌体提取请选用其它产品编号的试剂盒。 外泌体是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体 )的膜性小囊泡，直径约为30-150nm，天然存在于血液、唾液、尿液和母乳等各种体液中，研究发现，Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质、mRNA和microRNA，并且exosome能够通过生物屏障，在细胞间传递功能性核酸分子，从而发挥各种生物学功能。 外泌体囊泡已经成为细胞间通讯的重要介质，参与原核生物和高等真核生物细胞之间的生物信号传递，以调节不同范围的生物过程。外泌体囊泡的病理生理作用开始在包括癌症、感染性疾病和神经变性疾病在内的疾病中得到充分认识，显现了外泌体作为疾病的早期诊断、治疗干预的潜在新靶点的巨大应用前景。此外，未修饰和工程化的外泌体囊泡可能在大分子药物递送中具有应用价值。 传统的体液中分离和提取exosome的主要方法是超速离心法，这种方法缺点是耗时耗力，往往需要30-70个小时，每次最多只能处理6个样品，需要大量的起始材料，而且产量不高。 生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒系列产品，可以通过简单离心快速高效获得高纯度外泌体颗粒。本试剂盒提取的外泌体完好无缺，能用于各种功能研究、蛋白分析及RNA分析等下游应用实验。 本试剂盒按每个样本处理4ml体液计，每个50T试剂盒大约可以用于提取200ml体液。如果需要处理大量的体液样本，将提取液按与体液的体积比1：4加入体液样本中即可。 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。

2.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

外泌体研究

适用样本

体液

产品特点

1.使用方便，无需超速离心，省时省力；

2.纯度高，富集量大，应用范围广；

3.获取的Exosome结构和功能完整；

4.稳定性好，便于运输，便于保存。

产品应用

外泌体研究

仪器准备

1.离心机

2.移液器

3.冰箱

4.冰盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

1.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。

2.以下以4ml体液为例，实际操作时按体液和提取液A用量体积比4：1使用即可。

3.不同体液中所含的外泌体数量差异极大，请根据实际情况选择体液样品的量，根据下游应用和参考文献确定。条件允许的情况下采用尽可能多的体液样本。

4.除非已经确认体液样本中含有较多外泌体或者体液样本较难获得，一般体液样本建议每个样体液用量不少于8ml。最好能上样量为15-20ml及以上，条件允许的情况下采用尽可能多的体液样本。

5.条件允许的情况下可以将体液样本浓缩后再提取外泌体。

6.已经分离好的外泌体样本如果需要进行电镜观察，只能冰上或4℃保存，存放时间不超过两天，注意不可冷冻保存，否则可能会影响电镜观察效果。

使用方法

1. 收集4ml待提取的体液样品，置2-8℃保存。

2. 将样品在4℃条件下，3000×g离心15分钟。弃沉淀，收集上清。

3. 小心将上清移入另一干净离心管中。

4. 将样品在4℃条件下，10000×g离心20分钟。弃沉淀，收集上清。

5. 小心将上清移入另一干净离心管中。

6. 在4ml上清中加入1ml提取液A，盖紧离心管盖，上下颠倒混匀1分钟左右，使液体充分混匀。

7. 置2-8℃冰箱静置过夜。

8. 在4℃条件下，10000×g离心60分钟。

9. 小心移除上清，收集沉淀。

10. 取50-100ul外泌体保存液将沉淀重悬，即得到外泌体样品。

11. 将外泌体样本-80℃保存或直接用于下游应用。

常见问题分析

1.准备做外泌体siRNA 的NGS 测序，初始样品量需要准备多少

普通体液样本建议使用40mL 以上的初始样品量。由于某些体液中外泌体含量比较低，建议先将样品浓缩，准备40mL 以上的浓缩液再使用本试剂盒提取外泌体。

2.如何鉴定提取的外泌体

通常使用透射电镜检测（形态）、粒径检测（大小）、外泌体标志蛋白Western blot检测等方法鉴定提取的外泌体。

3.外泌体WB标志蛋白用什么

在进行WB检测时，通常检测外泌体标志蛋白为CD63、CD9、CD81、TSG101 、ALIX、HSP70等。

4.进行外泌体WB鉴定时有什么内参蛋白可供选择

没有，该检测属于定性检测。

5.蛋白浓度低

很多细胞外泌体量不够下游应用，在条件允许的情况请尽可能加大培养上清的上样量。

处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。请选择高质量的蛋白裂解液或蛋白提取试剂盒。

6.抽提得到的RNA浓度低

很多细胞外泌体量不够下游应用，在条件允许的情况请尽可能加大培养上清的上样量。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。