植物核蛋白提取试剂盒-酶法

产品概述

植物核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织，如叶片、根、种子等植物组织中提取核蛋白。提取过程简单方便。制备的核蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解植物核组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒采用酶法提取，酶法提取制备的植物核蛋白，回收率提高，纯度高，保持天然活性，但是耗时较长。非酶法的提取试剂盒提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，但是回收率相比酶法较低。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。请根据实际需要选择试剂盒。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

保存温度

2-8℃

注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期

一年

检测方法

WB,IP等

适用样本

植物

产品特点

1.使用方便。

2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

产品应用

WB,IP等

仪器准备

1.离心机

2.振荡器

3.涡旋混匀器

4.移液器

5.冰箱

6.冰盒

试剂准备

1.PBS缓冲液

2.蛋白定量试剂盒

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.一次性手套

使用注意事项

使用注意事项：

 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法

1. 提取液制备：

每200 μl提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200-500 mg植物叶片组织样本用手术剪刀尽可能剪碎。

3. 加入1-2 ml PBS后用匀浆机充分匀浆或者加适量PBS后用匀浆器充分匀浆。

4. 将匀浆液用100 μm细胞筛过滤；

5. 将滤液在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。

6. 在沉淀中加入500 μl提取液A，充分混匀。

7. 将细胞悬液置振荡器上37℃振荡12-72小时。

8. 在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。

9. 在沉淀中加入1 ml提取液B，用匀浆器充分匀浆。

10. 置振荡器振荡15分钟。

11. 在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。

12. 在沉淀中加入100-200 μl冷的提取液C，充分混匀。

13. 置4℃振荡20-40分钟。

14. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。

15. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。

16. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

常见问题分析

1.蛋白浓度低

植物核蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，尽可能增加样本量。

处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当增加试剂A的匀浆次数，并适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

2.用什么方法定量蛋白

建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

3.提取时出现胶状沉淀

蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。

4.提取的蛋白具有活性吗

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。