组织铁(Fe)测试盒/比色法

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定原理:

在酸性溶液和还原剂的作用下,使运铁蛋白中铁与蛋白分离,使组织中的高铁还原成亚铁,后者与双吡啶结合成粉红色的络合物,在一定范围内,铁离子的多少与呈色深浅成正比关系。
二、试剂的组成与配制:
100mg/L 铁标准贮备液:1ml×1 支,4℃保存 3 个月。
2mg/L 铁标准应用液的配制:取铁标准贮备液 0.2ml 加双蒸水定溶至 10ml,4℃保存。
铁显色剂:2 号甲粉×1 支,2 号乙粉×1 支,2 号丙液 100ml×1 瓶,4℃保存 6 个月。
使用时将 2 号甲粉、2 号乙粉倒入 100ml2 号丙液中,充分混匀,溶解完全,即为铁显色剂,4℃避光保存。
三、操作步骤:
1、样本前处理:
动物组织的样本前处理:准确称取待测动物组织的重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰水浴条件机械匀浆,2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液待测。

植物组织的样本前处理:准确称取待测植物组织的重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的匀浆介质(匀浆介质推荐使用 0.1mol/L pH7~7.4 磷酸盐缓冲液),冰水浴条件下机械匀浆,3500 转/分,离心 10 分钟,取上清液待测。

2、操作表:

混匀后,沸水浴 5 分钟,流水冷却,3500 转/分钟,离心 10 分钟,取上清液 1.0ml,0.5cm 光径,波长520nm,双蒸水调零,测各管吸光度 OD 值。
四、计算公式:
1、计算公式:
*标准管铁含量为 2000 g/L,铁原子量为 55.847,所以标准管铁含量为 35.81 mol/L

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