描述

Y2HGold Yeast Strain 酵母双杂交用甘油菌

产品描述

酵母双杂交系统是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的双杂交系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。工作原理为：一个完整的酵母转录因子GAL4由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA- BD），C端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域（AD）。DB可以识别并结合上游激活序列（UAS），而AD能激活UAS下游基因进行转录，单独的BD或AD不能激活基因转录。正常情况，BD和AD不会结合，将待检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成诱饵融合蛋白（bait-DNA）和诱捕融合蛋白（prey-DNA），只有当诱饵和诱捕蛋白发生相互作用，促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。

Y2HGold是GAL4系统酵母双杂交用实验菌株，能直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过接合（mating）操作进行蛋白相互作用验证或双杂交文库筛选和构建。Y2HGold-GAL4酵母双杂交系统需要两种质粒配套使用，分别为pGBKT7和pGADT7。前者筛选标志为Trp，用于表达DNA-BD与诱饵蛋白（bait）的融合蛋白；后者筛选标志为Leu，用于表达AD与诱捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y2HGold有四个报告基因：AUR1-C，HIS3, ADE2, MEL1，分别由三个完全异源的Gal4反应启动元件-G1，G2，M1调控，这三种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分都不同。这一特征有效缩减假阳性发生的概率。因为，任何诱捕蛋白单独结合引起假阳性都需要识别3个不同序列，激活4个报告基因表达。另外，新报告基因AUR1-C与以往的营养缺陷报告基因相比，其筛选抗生素-金担子素（Aureobasidin A，AbA）可以有效杀死非抗性克隆，大大降低背景克隆的生长。具有更低背景，这一优势也可降低酵母双杂交假阳性发生的概率。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3, GAL2UAS-Gal2TATA-Ade2 URA3::MEL1UAS-Mel1TATAAUR1-C MEL1

基本信息

培养基：YPDA

培养条件：28℃，YPDA，有氧培养

保存方式：30%甘油，-20℃保存

转化方式：PEG/LiAC；电激；

基本应用：酵母双杂交实验

保存与运输方法

保存：-20℃保存，一年有效。

运输：干冰运输。

使用说明

提供的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证，如存在质量问题，请在收到产品三个月内通知我司。收到甘油菌后，请及时在固体平板上划线培养，挑取单菌落接种到液体培养基中，震荡培养后使用并保存新的甘油菌。

注意事项

1.使用甘油菌时可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固体琼脂平板即可；也可完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，菌株的活力会逐渐下降。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

仅供科研使用，不得用于临床检验及治疗使用。