BL21(DE3)感受态细胞
中文名称:BL21(DE3)感受态细胞
货号:KL10101-01
英文名称:BL21(DE3) Chemically Competent Cell
产品规格:
BL21(DE3) | 10×100μl |
pUC19 (control vector,10pg/μl) | 10μl |
保存条件(保质期): -80℃ (6 个月)
基因型:F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3)
产品说明:BL21 (DE3)感受态细胞用于高效表达克隆于含 有噬菌体 T7 启动子的表达载体(如pET 系列)的基因。人噬菌体 DE3 区含有 T7 噬菌体 RNA 聚合酶,该区整合于 BL21的染色体上, 所以称为 BL21(DE3)O 可同时表达 T7 RNA 聚合酶和大肠杆菌 RNA 聚合酶,用于 pET 系列,pGEX, pMAL 等质粒的蛋白表达。
BL21 (DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,经 PUC19 质粒检测转化效率达108cfu/ug
操作方法:
取 100ul 冰上融化的 BL21 (DE3)感受态细胞,加 入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置 25 分钟。
42C 水浴热激 45 秒,迅速放回冰上并静置 2 分钟,晃动会降低 转化效率。
向离心管中加入700ul 不含抗生素的无菌2YT 或LB 培养基,混 匀后 37°C, 200rpm复苏 60 分钟。
5000rpm 离心一分钟收菌,留取 100ul 左右上清轻轻吹打重悬 菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。
将平板倒置放于 37C 培养箱过夜培养。T
注意事项:
感受态细胞最好在冰上融化。
混入质粒时应轻柔操作。
转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
诱导时,IPTG 浓度可选(0. 1-2mM 均可)。
为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG 浓度需实 验者优化。