总脂酶[脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)]测试盒/比色法

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

一﹑测定意义:

脂蛋白脂酶(Lipoprotein Lipase LPL)存在肝外组织毛 细 血 管内皮细胞表面,它主要催化血浆中乳糜微粒(CM)和极低 密 度 脂 蛋 白(VLDL)中的甘油三酯(TG)水解,在乳糜微粒(CM)及极低密度脂 蛋白(VLDL)的降解中发挥重要作用。肝脂酶(Hepatic Lipase HL)则仅存在肝内皮细胞表面,它主要在中密度脂蛋白(LDL)和高密度脂 蛋白(HDL)代谢中起重要作用。

二﹑试剂组成与配制:

三﹑操作步骤:
1、样本的前处理:
①、称取组织的重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,制成 10%组织匀浆,2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液待测
②、血清(浆)样本直接取样进行测定。
2、操作表:
[注]:吸取试剂六时必须采用玻璃移液管,不可用移液枪进行操作吸取下层抽提液时采用玻璃注射器及硬膜外麻 醉针心针套(本所有售),不可用移液枪进行操作

混匀,静置 5 分钟,550 nm 处,0.5cm 光径,试剂六调零[注 7],将脂蛋白脂酶和肝脂酶管平行比色,测各管吸光度。

四﹑计算与举例:
1、血清(浆)的计算与举例:
①﹑定义:每毫升每小时在反应系统中所产生的 1 微摩尔(μmol)的游离脂肪酸 FFA 为 1 个酶活性单位(FFAμmol/ml 血清(浆)?小时)
②﹑计算公式:
脂蛋白脂酶 脂蛋白脂酶管 OD 值空白管 OD 值标准品浓度 样本测试前60 分钟1000活性(U/ml)标准管OD 值-空白管OD 值 (500?mol/L) 稀释倍数 20 分钟肝脂酶活性 肝脂酶管 OD 值空白管 OD 值标准品浓度 样本测试前60 分钟?1000(U/ml)标准管OD 值-空白管OD 值 (500?mol/L) 稀释倍数 20 分钟总脂酶活性 = 脂蛋白脂酶活性 + 肝脂酶活性
2、组织的计算与举例:
①﹑定义:
每毫克组织蛋白每小时在反应系统中所产生的 1 微摩尔(μmol)的游离脂肪酸 FFA 为 1 个酶活性单位(FFAμmol/mgprot?小时)
②﹑计算公式:
脂蛋白脂酶活性脂蛋白脂酶管 OD 值空白管 OD 值标准品浓度 样本测试前60 分钟待测匀浆蛋(U/mgprot) 标准管 OD 值-空白管 OD 值(500 mol / L)稀释倍数 20 分钟 (mgprot / L)脂酶活性脂蛋白脂酶管 OD 值空白管 OD 值标准品浓度 样本测试前60 分钟待测匀浆蛋(U/mgprot) 标准管 OD 值-空白管 OD 值(500 mol / L)稀释倍数 20 分钟 (mgprot / L)
五﹑测试原理:
脂蛋白脂酶(LPL) 和肝脂酶(HL) 可分解甘油三酯(TG) 并水解为甘油及游离脂肪酸(FFA),用铜试剂测定生成的游离脂肪酸(FFA)的量即可分别计算脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)的活性。
肝脂酶为糖蛋白,其活性不需要载脂蛋白(apolipoprotin)CⅡ激活及一些离子的激活,不受高浓度盐及鱼精蛋白的抑制,利用此特点即可分别计算脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)的活性。

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