总抗氧化能力(T-AOC）测试盒/微量法

注 意 :正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理:
在酸性环境下，还原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。

自备实验用品：

恒温水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，使用前预冷。

试剂一：液体 15mL×1 瓶，避光保存。

试剂二：液体 1.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体 1.5mL×1 瓶，避光保存。

混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，使用前 37℃预温。

样品的制备：

(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。

(2) 组织样品

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

(3) 细胞样品

按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

操作步骤：

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 593nm，蒸馏水调零。

2、操作表

注意：空白管只需测定一次。

总抗氧化能力计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.8442x-0.0048，R2=0.9979

（1）按样本质量计算

单位定义：每 g 样本每分钟产生 1μmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力（U/g 鲜重）=（△ A+0.0048）÷ 0.8442×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×W)÷T=59.228×（△ A+0.0048）÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 蛋白每分钟产生 1μmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力（U/mg prot）=（△ A+0.0048）÷0.8442×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr)÷T=59.228×（△ A+0.0048）÷Cpr

（3）按细胞计算

单位定义：每万个细胞每分钟产生 1μmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力（U/104cell）=（△ A+0.0048）÷0.8442×1000×V 样÷（V 样÷V 样总×细胞数量（万个））÷T= 59.228×（△ A+0.0048）÷ 细胞数量（万个）

（4）按液体体积计算

单位定义：每毫升样本每分钟产生 1μmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力（U/mL）=（△ A+0.0048）÷0.8442×1000÷T= 59.228×（△ A+0.0048）

V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，6μL；T：反应时间，20min；

W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.4221x - 0.0048；R

2=0.9979

（1）按样本质量计算

单位定义：每 g 样本每分钟产生 1μmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力（U/g 鲜重）=（△ A+0.0048）÷0.4221×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×W)÷T=118.455×（△ A+0.0048）÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 蛋白每分钟产生 1μmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力（U/mg prot）=（△ A+0.0048）÷0.4221×1000×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr)÷T=118.455×（△ A+0.0048）÷Cpr

(3) 按细胞计算

单位定义：每万个细胞每分钟产生 1μmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力（U/104cell）=（△ A+0.0048）÷0.4221×1000×V 样÷（V 样÷V 样总×细胞数量（万个））÷T= 118.455×（△ A+0.0048）÷ 细胞数量（万个）

（3）按液体体积计算

单位定义：每毫升样本每分钟产生 1μmolFe2+-TPTZ 定义为一个酶活力单位。

总抗氧化能力（U/mL）=（△ A+0.0048）÷0.4221×1000÷T= 118.455×（△ A+0.0048）

V 样总：加入提取液体积，1 mL；V 样：反应中样品体积，6μL；T：反应时间，20min；

W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL

注意事项：

1. 试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴乳胶手套操作。

2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。

3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。