硫辛酸(lipoic acid)ELISA 检测试剂盒 --竞争法 

货号：KL10001O 

说明书 仅供体外研究使用，不用于临床诊断! 

[检测范围] 30ng/L -1500ng/L 

[使用目的] 本试剂盒用于测定样本中硫辛酸（lipoic acid）的含量。 

[保存条件及有效期] 

1、试剂盒保存：2-8℃。 

2、有效期：6 个月 

3、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。 

4、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温 度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避 免潮湿。 

注意： 试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的 剩余试剂盒建议在首次实验后 1 个月内使用完毕。 产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保 是稳定的。 

[实验原理] 本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中硫辛酸（lipoic acid）水平。用纯化的硫辛酸（lipoic acid）抗体包被微孔 板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入硫辛酸（lipoic acid），和 HRP 标记的硫辛酸（lipoic acid）抗原，使它们 竞争结合，，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。样本颜色的深 浅和样品中的硫辛酸（lipoic acid）的含量呈负相关。用酶 标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计 算样品中硫辛酸（lipoic acid）的含量。 

[试剂盒内容] 

[需自备的设备及试剂] 

1、450±10nm 滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热) 

2、单道或多道微量加液器及吸头 

3、稀释样品的 EP 管 

4、蒸馏水或去离子水 

5、吸水纸 

6、盛放洗液的容器 

[标本的采集与保存] 

1、水样 采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤 后，备查 

2、组织 样品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提， 或按相关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，备查 

注意： 

1、以上标本均需密封保存，4℃保存应小于 1 周，-20℃不应 超过 1 个月，-80℃不应超过 2 个月。 

2、标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此 项检测。 3、标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。

[标本要求] 

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后 应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃ 保存，但应避免反复冻融 

2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的 （HRP）活性。 

[操作步骤] 

1. 加样：分别设标准孔、空白孔（空白对照孔不加样品及 酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标 包被板上标准孔中加 50 微升，待测样品孔中先加样品稀 释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度 为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及 孔壁，轻轻晃动混匀。 

2. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。 

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗 涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。 

6. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl， 轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟. 

7. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄 色）。

8. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度 （OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

注意： 1、标准品的稀释不能直接在板中进行。 2、标准品请于临用前 15 分钟内配制。该标准品只能使用一次。 3、浓洗涤液中如有结晶析出，请先温育至室温，轻轻混匀， 至到结晶完全溶解再进行配制。 4、试剂盒中部分试剂为储存液，客户需配置成工作液后使用， 在配置过程中如因纯净水质量差或水质污染，以及实验中所用 耗材洁净度差，可能造成实验结果不准确，甚至完全错误，请 使用双蒸水。 

[标本处理] 

1、本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成 的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用 量，预留充足的样本。 2、实验前应预测标本含量，如果标本浓度过高，应对标本进 行稀释，使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围，计算时再乘 以相应的稀释倍数。标本使用 0.01mol/L 的 PBS 稀释 (PH=7.0-7.2)。 

3、若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实 验验证其有效性，并注意留存样本。

4、使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于 某些化学物质的引入导致 ELISA 实验结果偏差。 

5、若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如： 细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的 情况。 

6、某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可 能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被 检测出。 

7、建议使用新鲜样本，保存时间过长可能会存在蛋白降解或 变性导致实验结果偏差。 

注意： 

1、试剂准备：准备一次实验所需要的酶标条，其它的可从微 孔板上拆下，密封，按照说明书要求保存，以备下次使用。 

2、加样：实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 加样时注意不要有气泡，将样品加于酶标板底部，尽量不触及 孔壁，轻轻晃动混匀。加样或加试剂时，第一个孔与最后一个 孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育” 时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。因此，一 次加样时间(包括标准品及所有样品)最好控制在 10 分钟内。 推荐设置复孔进行实验。 

3、温育：为防止样品蒸发，实验时请将加上盖或覆膜的酶标 板置于湿盒内，以避免液体蒸发，洗板后应尽快进行下步操作， 任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态，同时应严格遵守给定 的温育时间和温度。 

4、洗涤：充分的洗涤非常重要，在每次洗涤过程中，都要将 洗涤液完全甩干。洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸 上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残 留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。如果有自动 洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 

5、反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变 化(比如，每隔 10 分钟观察一次)，如颜色较深，请提前加入 终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。 

6、底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照 射。 

7、如果实验室内湿度低于 60%，推荐使用加湿器提高湿度水 平。 

[计算] 以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出 标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再 乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的 直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓 度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 

[典型数据] 为了便于计算，尽管浓度为自变量而 O.D.值为因变量，我们 绘图时仍采用标准品的 O.D.值作为横坐标(X 轴)，标准品的浓 度为纵坐标(Y 轴)。同时为了试验结果的直观性，图中提供的 是原始数据而非对数值。推荐使用对数值建立标准曲线图。由 于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和温 度条件等），标准曲线的 O.D.值会有所差异。所提供的标准 曲线仅供参考，实验者需要根据自已的实验建立标准曲线。 

[说明] 

1、由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的 所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量 技术风险。

2、最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及 当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。 

3、不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵 敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作， 网站电子版说明书仅作参考。 

4、只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能 混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才 会得到最佳的检测结果。 

5、在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂 瓶盖须盖紧以防止蒸发和微生物的污染，因为蛋白水解酶的干 扰将导致出现错误的结果。 

6、刚开启的酶联板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现 象，不会对实验结果造成任何影响。请勿提前将酶标板从包装 袋里拿出。 

7、由于操作者不熟练、操作失误或读数仪程序选用错误等有 可能会导致错误结果的产生。请使用者使用该产品前仔细阅读 说明书，调试好酶标仪，请使用配备有 450±10nm 滤光片的酶 标仪，且该酶标仪测量范围在 0.001-3.000 O.D.或以上。 

8、同一使用者在使用同一产品时，如不同时间订购，也可能 会因不同批次的少量差异产生不同结果，因此建议使用者在每 次使用前均进行预实验。 

9、试剂盒在出厂前均经过严格检测，但由于各实验室条件差 异，可能会造成实验结果与出厂结果不一致或不同批次试剂盒 批间差大的情况，对于这种情况会酌情处理。 

10、本试剂盒未与其他厂家同类试剂盒或不同方法检测同一目 的蛋白的产品做对比，平行检测可能会存在检测结果不一致的 情况。 

11、本操作说明同样适用于 48T/96T 试剂盒，但 48T 试剂盒所 有试剂减半。 

12、本试剂盒中的标准以及用于抗体制备的抗原通常是重组蛋 白。不同表达的序列、表达系统和/或纯化方法可用于重组蛋 白的制备。在我们的试剂盒中，抗体和抗体对的筛选技术也有可能存在差异。因此，我们不能保证我们的试剂盒能够检测到 其他公司生产或自备的重组蛋白。我们不建议使用我们的 ELISA 试剂盒检测其他重组蛋白。具体看使用目的。 13、请严格按照说明书稀释倍数做实验，不按照说明书操作的， 造成任何售后、结果，我们这边不处理，不退换货的。