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细胞培养之血清小知识

细胞培养的路上,有多虐心就有多少注意的地方。作为生物学研究最基础的技术之一,细胞培养可以说渗透科研界的方方面面。现在就将怎样选择血清以及保存血清的方法分享给大家

一、什么是血清

血清是血液凝固后在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体,或指纤维蛋白原已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质,提供激素和各种生长因子,提供结合蛋白,提供促接触和生长因子,使细胞贴壁免受机械损伤,对培养中的细胞起到某些保护作用。


二、胎牛/新生牛/小牛血清区别

胎牛血清:指健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清,其胎球蛋白较多,血清白蛋白含量高,而r-球蛋白含量极低甚至没有,并富含多种生长因子,是培养细胞最优质的血清。


新生牛血清:指健康母牛正常分娩后不久采集加工而成的血清,其内含多种生长因子。


小牛血清:指出生后饲养一定时间(一周至六个月)再采集加工而成的血清,因与外界接触时间过长,故血清内r-球蛋白含量较高,不利于细胞培养,特别是不利于病毒研究与疫苗生产。

1、采血时间不同

胎牛血清(Fetal Bovine Serum)是在母牛怀孕5-8个月时,通过胎牛心脏穿刺采血获取的血清。新生牛血清(Newborn Calf Serum)是来自刚出生~出生后2周内的新生牛静脉取血。小牛血清(Calf Serum)采自出生后2周至1年内的小牛静脉取血。


2、组份与比例不同

两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同。胎牛血清尤其含有胚胎发育所必需的生长因子。一些生长因子到胎牛10个月时就消失了。


3、用途与用法不同

某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可。使用浓度一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。血清保存和使用须注意:血清应保存在-5℃至-20℃。解冻血清时,推荐我们总结出来的三步法(见下表),可预防沉淀发生。不推荐血清4℃过夜融化,更不能直接将冷冻的血清放入37℃水浴或者温箱中。因为血清在融化时,蛋白先融,冰块后融,局部蛋白浓度过高,易发生沉淀。血清在解冻后,应按用量分装并于-20℃保存,避免反复冻融。


使用与原来培养条件不同类别的血清?

不能使用与原来培养条件不同类别的血清。

血清是培养细胞的一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,其含有的细胞生长必须的营养成分不同,所以血清使用错误常会造成细胞无法存活。


何时更换培养基/血清?

视细胞生长密度而定,或遵照细胞建株的时间要求,按时更换培养基即可。另外,由于每一细胞株均有与其相适应的细胞培养基,不能骤然使用和原先提供的培养条件不同的培养基。这会影响细胞生长,实在无法供应的应半量替换,使细胞有一适应期。

更换不同批次血清前应做细胞适应性实验,不能立即完全更换血清批号,防止细胞因不适应新批次血清而死亡,降低损失。


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